Des produits

Nouveau test de chromatographie liquide haute performance pour les glycosyltransférases basé sur la dérivatisation avec l'acide anthranilique et la détection de fluorescence.

Des tests ont été développés en utilisant la chimie de marquage unique de l'acide 2-aminobenzoïque (2AA ; acide anthranilique, AA) pour mesurer les activités de la β1-4 galactosyltransférase (GalT-1) et de l'α2-6 sialyltransférase (ST-6) par un liquide haute performance chromatographie (HPLC) avec détection de fluorescence (Anumula KR. 2006. Advances in fluorescence derivatization methods for high-performance liquid chromatographic analysis of glycoprotein carbohydrates. Anal Biochem. 350:1-23).La N-acétylglucosamine (GlcNAc) et la N-acétyllactosamine ont été utilisées comme accepteurs et l'uridine diphosphate (UDP)-galactose et l'acide cytidine monophosphate (CMP)-N-acétylneuraminique (NANA) comme donneurs pour GalT-1 et ST-6, respectivement.Les produits enzymatiques ont été marqués in situ avec de l'AA et ont été séparés des substrats sur une colonne TSKgel Amide 80 en utilisant des conditions de phase normale.Les unités enzymatiques ont été déterminées à partir des zones de pic par comparaison avec les étalons dérivés simultanément Gal-β1-4GlcNAc et NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.La linéarité (temps et concentration en enzyme), la précision (intra- et inter-essai) et la reproductibilité des essais ont été établies.Les dosages se sont avérés utiles pour surveiller les activités enzymatiques pendant l'isolement et la purification.Les dosages étaient très sensibles et ont donné des résultats égaux ou supérieurs aux mesures traditionnelles à base de sucre radioactif.Le format d'essai peut également être utilisé pour mesurer l'activité d'autres transférases, à condition que les accepteurs de glucides contiennent une extrémité réductrice pour le marquage.Un dosage des accepteurs de glycoprotéines a été développé à l'aide d'IgG.Une méthode de profilage HPLC courte a été développée pour la séparation des glycanes IgG (biantennaires G0, G1, G2, mono- et disialylés), ce qui a facilité la détermination des activités GalT-1 et ST-6 de manière rapide.En outre, cette méthode de profilage devrait s'avérer utile pour surveiller les changements dans les glycanes IgG en milieu clinique.