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Il y a beaucoup de héros méconnus autour de nous, qui semblent être ordinaires, mais en fait, ils nous apportent silencieusement beaucoup.La protéinase K est le "héros méconnu" de l'industrie du diagnostic moléculaire, bien que comparée aux "grands et puissants" de l'industrie, la protéinase K est si discrète que nous avons longtemps négligé son importance.Avec le déclenchement de la nouvelle épidémie de couronne, la demande de protéinase K a grimpé en flèche et l'offre nationale et étrangère est loin derrière la consommation, et tout le monde a soudainement réalisé que la protéinase K est si importante.
Quelle est l'utilité de la protéinase K
La protéinase K est une sérine protéase avec une activité enzymatique protéolytique et peut maintenir son activité dans une large gamme d'environnements (pH (4-12,5), tampon à haute teneur en sel, température élevée de 70°C, etc.).De plus, l'activité de la protéinase K n'est pas inhibée par le SDS, l'urée, l'EDTA, le chlorhydrate de guanidine, l'isothiocyanate de guanidine, etc., et une certaine quantité de détergent peut également améliorer l'activité de la protéinase K. Dans le traitement médical (désinfection virale et microbienne ), alimentaire (attendrissement de la viande), cuir (adoucissement des cheveux), vinification (clarification de l'alcool), préparation d'acides aminés (plumes dégradées), extraction d'acides nucléiques, hybridation in situ, etc., protéinase K Il y a des applications.L'application la plus couramment utilisée est l'extraction d'acide nucléique.
La protéinase K peut enzymolyser toutes sortes de protéines dans l'échantillon, y compris les histones qui sont étroitement liées aux acides nucléiques, de sorte que les acides nucléiques peuvent être libérés de l'échantillon et libérés dans l'extrait, facilitant la prochaine étape d'extraction et de purification.Dans la détection de l'acide nucléique viral, la protéinase K est l'un des composants importants de la solution d'échantillonnage du virus.La protéinase K peut craquer et inactiver la protéine d'enveloppe du virus, qui est plus sûre pendant l'étape de transport et de détection ;en outre, la protéinase K peut également dégrader la RNase, empêche la dégradation de l'ARN viral et facilite la détection des acides nucléiques.
La célébrité du jour au lendemain de la protéinase K
Que ce soit dans le domaine de la recherche scientifique ou dans le domaine de l'IVD, l'extraction d'acide nucléique est l'expérience la plus fondamentale, de sorte que la protéinase K a toujours été une existence très importante.Cependant, dans le passé, la protéinase K était bien moins connue que son rôle.Cela était dû en grande partie au fait que la relation entre l'offre et la demande de protéinase K était très stable.Peu de gens penseraient que l'approvisionnement en protéinase K serait un problème.
Avec le déclenchement de la nouvelle épidémie de la couronne, la demande de tests d'acide nucléique a augmenté.Fin juin 2020, la Chine avait réalisé près de 90 millions de nouveaux tests de couronnes, et ce nombre est encore plus alarmant à l'échelle mondiale.Dans les expériences d'extraction d'acide nucléique, la concentration de travail de la protéinase K est d'environ 50 à 200 μg/mL.Généralement, il faut environ 100 µg de protéinase K pour extraire un échantillon d'acide nucléique.En utilisation réelle, afin d'augmenter l'efficacité de l'extraction de l'acide nucléique, la protéinase K sera souvent utilisée en quantité accrue.La détection des acides nucléiques du nouveau coronavirus a entraîné une demande importante de protéinase K.L'équilibre initial entre l'offre et la demande de protéinase K a été rapidement rompu et la protéinase K est devenue du jour au lendemain un important matériel de prévention des épidémies.
Difficultés dans la production de protéinase K
Bien qu'avec le développement de l'épidémie, la valeur importante de la protéinase K ait été appréciée par les gens, il est gênant qu'en raison de la discrétion excessive de la protéinase K, peu d'entreprises nationales aient été impliquées dans la production de protéinase K. Lorsque les gens veulent établir la production de protéinase K Au cours du processus de production, il a été découvert que la protéinase K est une protéine extrêmement spéciale.Il est extrêmement difficile d'augmenter la capacité de production de protéinase K en peu de temps.
La production à grande échelle de protéinase K se heurte aux difficultés suivantes
1. Faible expression
La protéinase K peut dégrader de manière non spécifique la plupart des protéines et provoquer une toxicité grave pour la cellule hôte d'expression.Par conséquent, le niveau d'expression de la protéinase K est généralement très faible.Le criblage des systèmes d'expression et des souches qui expriment fortement la protéinase K nécessite généralement un cycle plus long.
2. Résidus de pigments et d'acides nucléiques
La fermentation à grande échelle introduit une grande quantité de pigments et de résidus d'acide nucléique hôte.Il est difficile d'éliminer ces impuretés avec un processus de purification simple, et une purification complexe augmente le coût et réduit le taux de récupération.
3. Instabilité
La protéinase K n'est pas assez stable, elle peut s'enzymolyser et il est difficile de la conserver de manière stable à 37°C pendant une longue période sans agent protecteur.
4. Facile à précipiter
Lors de la préparation de la poudre lyophilisée de protéinase K, afin de s'assurer que la teneur en solides de la protéinase K dans la poudre lyophilisée est importante, il est nécessaire d'ajouter un agent protecteur lyophilisé à une concentration élevée, mais lorsque le la concentration de protéinase K atteint 20mg/mL et au-dessus, c'est facile L'agrégation forme un précipité, ce qui apporte de grandes difficultés à la lyophilisation de la protéinase K à haute teneur en solides.
5. Gros investissement
La protéinase K a une forte activité protéasique et peut hydrolyser d'autres protéases en laboratoire.Par conséquent, la protéinase K nécessite des zones de production spécialisées, des équipements et du personnel pour la recherche et le développement et la production.
Solution de protéinase K de XD BIOCHEM
XD BIOCHEM has a mature protein expression and purification platform, and has rich experience in the expression and purification of recombinant proteins and optimization of production processes. Through the rapid formation of a research and development team, the large-scale production process of proteinase K has been overcome. The monthly output of freeze-dried powder is more than 30 KG. The product has stable performance, high enzyme specific activity, and no host cytochrome and nucleic acid residues. Welcome to contact XD BIOCHEM Obtain a trial package (E-mail: sales@xdbiochem.com Tel: +86 513 81163739).
Les solutions techniques de XD BIOCHEM comprennent
En utilisant l'intégration de plasmide multicopie, des souches à haute expression avec un niveau d'expression de 8 g/L sont sélectionnées, ce qui surmonte le problème du faible niveau d'expression de la protéinase K ;
Grâce à la mise en place d'un processus de purification en plusieurs étapes, le cytochrome hôte et les résidus d'acide nucléique de la protéinase K ont été éliminés avec succès en dessous de la valeur standard ;
Grâce à un criblage à haut débit de formulations de tampons protecteurs, un tampon capable de stocker de manière stable la protéinase K à 37 ° C a été sélectionné ;
Les tampons de criblage surmontent le problème selon lequel la protéinase K est facile à agréger et à précipiter à des concentrations élevées, et jette les bases de la lyophilisation à haute teneur en solides de la protéinase K.

Échantillon de protéinase K XD BIOCHEM

Test de stabilité de la protéinase K XD BIOCHEM : il n'y aura pas de changement significatif d'activité après 80 jours à température ambiante

Test de stabilité de la protéinase K XD BIOCHEM : il n'y aura pas de changement significatif d'activité après 80 jours à température ambiante

Comparaison de l'effet d'extraction d'acide nucléique de la protéinase K XD BIOCHEM et des produits concurrents.Dans le processus d'extraction d'acide nucléique, XD BIOCHEM et la protéinase K compétitive sont utilisées respectivement.L'efficacité d'extraction de la protéinase K XD BIOCHEM est plus élevée et la valeur Ct du gène cible est plus faible.