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L'indoléamine 2,3-dioxygénase (IDO1) et le tryptophane 2,3-dioxygénase (TDO) sont deux enzymes structurellement différentes qui ont une distribution tissulaire et des rôles physiologiques différents, mais qui catalysent toutes deux la conversion du tryptophane en N-formylkynurénine (NFK).IDO1 a été cliniquement validé en tant que cible médicamenteuse à petite molécule pour le cancer, tandis que des études précliniques indiquent que TDO pourrait être une cible pour l'immunothérapie du cancer et les maladies neurodégénératives.Nous avons développé un test de criblage à haut débit pour IDO1 et TDO basé sur une nouvelle sonde chimique, NFK Green, qui réagit spécifiquement avec NFK pour former une molécule fluorescente verte avec une longueur d'onde d'excitation de 400 nm et une longueur d'onde d'émission de 510 nm.Nous fournissons la première comparaison côte à côte d'un certain nombre d'inhibiteurs publiés d'IDO1 et de TDO et révélons que l'inhibiteur préclinique d'IDO1, le composé 5l, présente une réactivité croisée significative avec le TDO, tandis que la sélectivité relative d'autres inhibiteurs publiés a été confirmée.L'aptitude au criblage à haut débit des tests a été démontrée en criblant une bibliothèque de 87 000 substances chimiques dans un format de 384 ou 1 536 puits.Enfin, nous démontrons que le test peut également être utilisé pour mesurer la capacité des cellules à métaboliser le tryptophane et pour mesurer la puissance cellulaire des inhibiteurs d'IDO1 et de TDO.