Des produits

Semblables à d'autres virus à ARN à brin positif, les tombusvirus sont répliqués par le complexe de réplicase virale liée à la membrane (VRC).Le VRC se compose de l'ARN polymérase dépendante de l'ARN codée par le virus p92 (RdRp), de l'ARN chaperon viral p33 et de plusieurs protéines hôtes cooptées.Afin de devenir un RdRp fonctionnel après sa traduction, la protéine de réplication p92 doit être incorporée dans le VRC, suivie de son activation.Nous avons déjà montré dans un essai à base d'extrait de levure acellulaire que l'activation du virus du rabougrissement buissonnant de la tomate (TBSV) RdRp nécessite un ou plusieurs facteurs hôtes solubles.Dans cet article, nous identifions la protéine de choc thermique cellulaire 70 (Hsp70) comme le facteur hôte coopté requis pour l'activation d'un TBSV RdRp recombinant tronqué à l'extrémité N-terminale.De plus, le blocage à base de petites molécules de la fonction Hsp70 inhibe la synthèse d'ARN par le tombusvirus RdRp in vitro.En outre, nous montrons que les phospholipides neutres, à savoir la phosphatidyléthanolamine (PE) et la phosphatidylcholine (PC), améliorent l'activation de RdRp in vitro.En revanche, le phosphatidylglycérol (PG) montre un effet inhibiteur fort et dominant sur l'activation de RdRp in vitro.Nous démontrons également que PE et PC stimulent l'interaction RdRp-viral plus-strand RNA [(+)RNA], tandis que PG inhibe la liaison de l'ARN viral au RdRp.Sur la base des rôles stimulateurs et inhibiteurs de divers phospholipides dans l'activation du RdRp du tombusvirus, nous proposons que la composition lipidique des membranes sous-cellulaires ciblées pourrait être utilisée par les tombusvirus pour réguler l'assemblage de nouveaux VRC au cours de l'infection. L'ARN polymérase dépendante de l'ARN codée par le virus (RdRp), qui est responsable de la synthèse de la descendance de l'ARN viral dans les cellules infectées de plusieurs virus à ARN à brin positif, est initialement inactif.Cette stratégie est susceptible d'éviter la synthèse d'ARN viral dans le cytosol qui conduirait rapidement à l'induction de réponses antivirales cellulaires déclenchées par l'ARN.Au cours de l'assemblage du complexe de réplicase lié à la membrane, le RdRp viral est activé par un processus incomplètement compris qui rend le RdRp capable de synthèse d'ARN.En utilisant TBSV RdRp, nous montrons que le chaperon Hsp70 cellulaire coopté et les phospholipides neutres facilitent l'activation de RdRp in vitro.En revanche, le phosphatidylglycérol (PG) a un effet inhibiteur dominant sur l'activation in vitro de RdRp et l'interaction RdRp-ARN viral, ce qui suggère que le microdomaine membranaire entourant le RdRp affecte grandement sa capacité de synthèse d'ARN.Ainsi, l'activation de la RdRp virale dépend probablement de plusieurs composants de l'hôte dans les cellules infectées.