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La protéine ORF45 du virus de l'herpès associé au sarcome de Kaposi (KSHV) est une protéine du tégument précoce immédiat spécifique du gammaherpèsvirus.Nos études précédentes ont révélé ses rôles cruciaux dans les stades précoces et tardifs de l'infection par le KSHV.Dans cette étude, nous avons sondé l'interactome de l'ORF45 à l'aide d'un panel d'anticorps monoclonaux.En plus des protéines kinase régulée extracellulaire (ERK) et p90 ribosomale S6 kinase (RSK) précédemment identifiées, nous avons trouvé plusieurs autres protéines copurifiées, y compris des protéines proéminentes d'environ 38 kDa et d'environ 130 kDa.La spectrométrie de masse a révélé que la protéine de 38 kDa est l'ORF33 viral et que la protéine de 130 kDa est l'USP7 cellulaire (protéase 7 spécifique à l'ubiquitine).Nous avons cartographié le domaine de liaison ORF33 aux 19 acides aminés carboxy-terminaux hautement conservés (aa) de ORF45 et le domaine de liaison USP7 au motif consensus rapporté dans la région centrale de ORF45.En utilisant la coloration par immunofluorescence, nous avons observé la colocalisation d'ORF45 avec ORF33 ou USP7 à la fois dans des conditions transfectées et dans des cellules infectées par le KSHV.De plus, nous avons remarqué une relocalisation dépendante de l'ORF45 d'une partie de l'ORF33/USP7 du noyau vers le cytoplasme.Nous avons constaté que l'ORF45 provoquait une augmentation de l'accumulation de la protéine ORF33 qui était supprimée si le domaine de liaison à l'ORF33 ou à l'USP7 dans l'ORF45 était supprimé.En outre, la suppression de l'extrémité carboxyle conservée de l'ORF45 dans le génome du KSHV a considérablement réduit le niveau de protéine ORF33 dans les cellules infectées par le KSHV et a aboli la production de virions descendants.Ensemble, nos résultats révèlent non seulement de nouveaux composants de l'interactome ORF45, mais démontrent également que les interactions entre ces protéines sont cruciales pour la réplication lytique du KSHV. L'herpèsvirus associé au sarcome de Kaposi (KSHV) est l'agent causal de plusieurs cancers humains.KSHV ORF45 est une protéine multifonctionnelle qui est requise pour la réplication lytique de KSHV, mais les mécanismes exacts par lesquels ORF45 remplit ses fonctions critiques ne sont pas clairs.Nos études précédentes ont révélé que toutes les protéines ORF45 présentes dans les cellules existent dans des complexes de haut poids moléculaire.Nous avons donc cherché à caractériser l'interactome d'ORF45 pour mieux comprendre ses rôles lors de la réplication lytique.À l'aide d'un panel d'anticorps monoclonaux, nous avons étudié l'interactome ORF45 dans des cellules infectées par le KSHV.Nous avons identifié deux nouveaux partenaires de liaison de l'ORF45 : la protéine virale ORF33 et la protéase 7 spécifique de l'ubiquitine cellulaire (USP7).Nous démontrons en outre que l'interaction entre ORF45 et ORF33 est cruciale pour la production efficace de particules virales KSHV, ce qui suggère que l'interférence ciblée avec cette interaction peut représenter une nouvelle stratégie pour inhiber la réplication lytique du KSHV.