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1. Les méthodes de profilage des métabolites sont des outils importants pour la mesure des pools de métabolites dans les systèmes biologiques.Alors que la plupart des méthodes de profilage des métabolites rapportent des intensités relatives ou dépendent de quelques normes internes représentant tous les métabolites, l'exigence ultime pour une description quantitative du pool de métabolites dans les cellules et les fluides biologiques est la détermination de la concentration absolue.Nous rapportons ici une méthode de profilage des métabolites ciblée par chromatographie en phase gazeuse/spectrométrie de masse en tandem (GC/MS/MS) à haut débit et sensible permettant la quantification absolue de tous les métabolites détectés.La méthode est basée sur la dérivatisation et la quantification du chloroformiate de méthyle en dopant des échantillons avec des étalons de métabolites séparément dérivatisés avec des réactifs de dérivatisation deutérés.L'ionisation par impact électronique traditionnelle est remplacée par l'ionisation chimique positive car cette dernière préserve dans une bien plus large mesure l'ion moléculaire et les autres fragments de haut poids moléculaire.Cela a facilité la sélection de transitions MS/MS uniques parmi les nombreux métabolites coéluants.Actuellement, la nouvelle méthode GC/MS/MS comprend 67 métabolites primaires communs dont la plupart appartiennent aux groupes d'acides organiques aminés et non aminés.Nous montrons l'applicabilité de la méthode sur des échantillons d'urine et de sérum.La méthode est une amélioration significative de la méthodologie actuelle pour le profilage quantitatif des métabolites GC/MS des acides aminés et des acides organiques non aminés.

Le 2.24S-hydroxycholestérol (24OHC) et le 27-hydroxycholestérol (27OHC) sont deux oxystérols structurellement similaires d'origines différentes - le premier formé presque exclusivement dans le cerveau et le second formé dans une moindre mesure dans le cerveau que dans la plupart des autres organes.HYPOTHÈSE À TESTER : Les lésions neuronales et/ou la démyélinisation entraînent une augmentation du flux de 24OHC du cerveau vers le liquide céphalo-rachidien (LCR), alors qu'un défaut de la barrière hémato-encéphalique entraîne une augmentation du flux de 27OHC de la circulation vers le LCR.Masse de dilution isotopique la spectrométrie a été utilisée pour doser les deux oxystérols dans le LCR et le plasma de plus de 250 patients atteints de différentes maladies neurologiques et gériatriques. Les niveaux de LCR des deux oxystérols étaient beaucoup plus affectés par les différentes maladies que les niveaux plasmatiques.Les patients atteints de maladies démyélinisantes actives présentaient des niveaux accrus de 24OHC dans le LCR avec un rapport 24OHC/27OHC relativement élevé.Les patients atteints de méningite avaient en général des niveaux élevés des deux stéroïdes avec un faible rapport 24OHC/27OHC.Les patients atteints de la maladie d'Alzheimer avaient des niveaux légèrement accrus de 24OHC dans le LCR avec une augmentation moindre de 27OHC.Les patients atteints de sclérose en plaques avaient tendance à avoir des niveaux plus élevés de 24OHC pendant les périodes actives avec un rapport 24OHC/27OHC élevé. Les mesures des deux oxystérols dans le LCR et le plasma peuvent ajouter de manière significative aux méthodes biochimiques existantes pour l'évaluation des maladies neurologiques.