Des produits

Aperçus mécanistes d'une famille d'alpha-mannosidases dépendante du Ca2+ dans un symbiote intestinal humain.

Les bactéries du côlon, illustrées par Bacteroides thetaiotaomicron, jouent un rôle clé dans le maintien de la santé humaine en exploitant de grandes familles de glycoside hydrolases (GH) pour exploiter les polysaccharides alimentaires et les glycanes hôtes comme nutriments.Une telle expansion de la famille GH est illustrée par les 23 glycosidases de la famille GH92 codées par le génome de B. thetaiotaomicron.Ici, nous montrons qu'il s'agit d'alpha-mannosidases qui agissent via un mécanisme de déplacement unique pour utiliser les N-glycanes hôtes.La structure tridimensionnelle de deux mannosidases GH92 définit une famille de protéines à deux domaines dans laquelle le centre catalytique est situé à l'interface du domaine, fournissant une aide acide (glutamate) et basique (aspartate) à l'hydrolyse dans un Ca(2+)- manière dépendante.Les structures tridimensionnelles des GH92 en complexe avec des inhibiteurs donnent un aperçu de la spécificité, du mécanisme et de l'itinéraire conformationnel de la catalyse.Le Ca(2+) joue un rôle catalytique clé en aidant à déformer le mannoside de sa conformation de chaise à l'état fondamental (4)C(1) vers l'état de transition. (Bibliographie : Nat.Chim.Biol.6, 125-32, (2010）

Chromatographie d'affinité frontale d'ovalbumine glycoasparagines sur une colonne de concanavaline A-sépharose.Une étude quantitative de la spécificité de liaison de la lectine.

Les interactions de la concanavaline A (ConA) immobilisée sur Sepharose 4B avec 10 glycoasparagines dérivées de l'ovalbumine ont été étudiées quantitativement par chromatographie d'affinité frontale.Dans cette méthode, une solution de glucides est appliquée en continu sur une colonne de ConA-Sepharose et le retard du front d'élution est mesuré comme paramètre de la force de l'interaction.La constante de dissociation (Kd) pour chaque saccharide avec ConA peut être déterminée.Une analyse de la liaison du p-nitrophényl-alpha,D-mannoside a montré que les propriétés de liaison de la ConA ne changent pas essentiellement après immobilisation sur Sépharose 4B.Chacune des glycoasparagines d'ovalbumine a été marquée au tritium par la méthode de méthylation réductrice pour analyse.Une comparaison des valeurs de Kd obtenues a montré que la liaison de la ConA varie considérablement avec de très légères différences structurales de la chaîne glycosyle.Les résultats suggèrent que ConA reconnaît une structure de chaîne glycosyle spécifique, Man alpha 1-6 (Man alpha 1-3) Man, dans laquelle au moins un groupe hydroxyle en position C-3 du mannose lié à C-6 doit être libre.