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Effets des détergents sur l'activité atpase de la glycoprotéine P : différences dans les perturbations des activités basales et dépendantes du vérapamil.

La glycoprotéine P (P-gp), une glycoprotéine de la membrane plasmique associée au phénotype de résistance multidrogue, est responsable de l'efflux dépendant de l'ATP de divers médicaments amphiphiles.A l'aide de vésicules membranaires préparées à partir de la lignée cellulaire multirésistante DC-3F/ADX, nous avons étudié la perturbation des activités basales (c'est-à-dire en l'absence de médicament) et P-gp ATPase dépendantes du vérapamil induites par divers détergents, à des conditions non solubilisantes, ainsi qu'aux concentrations solubilisantes.La solubilisation progressive de la membrane avec l'augmentation de la concentration en détergent a été contrôlée par des expériences de diffusion de la lumière et de centrifugation.Pour les concentrations de détergents non solubilisants, tous les détergents testés à l'exception du DOC ont induit une inhibition partielle de l'activité P-gp ATPase, qui n'était pas corrélée avec la quantité des différents détergents testés incorporés dans les membranes.L'analyse de l'activation de la P-gp induite par le vérapamil révèle que l'activité de la P-gp ATPase est modulée différemment par les divers détergents à des concentrations non solubilisantes.Ainsi, des interactions spécifiques entre la P-gp et les détergents sont plus susceptibles de se produire plutôt qu'une perturbation globale de la membrane.Après solubilisation par les différents détergents testés, l'activité basale de la P-gp ATPase était quasiment totalement inhibée, sauf en présence de CHAPS qui a pu conserver cette activité à un niveau comparable à celui mesuré dans les membranes natives.Cependant, l'activation de la P-gp ATPase induite par le vérapamil a été perdue lors de la solubilisation de la P-gp par CHAPS, mais récupérée après dilution de CHAPS en dessous de sa concentration micellaire critique.Ces observations indiquent des interactions spécifiques entre les molécules P-gp et CHAPS au sein des micelles mixtes.Dans l'ensemble, nos données mettant en évidence des interactions spécifiques P-gp/détergents sont cohérentes avec la localisation des sites de transport de médicaments sur les domaines transmembranaires P-gp.